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高分辨率熔解

高分辨率熔解

高分辨率熔解(High-resolution melting,简称HRM)分析是一门新兴的技术。又称为HRM技术应用广泛,操作简单又经济,结果精确且可靠,适合任何实验室使用。它仅仅通过PCR之后的熔解曲线分析,就能检测PCR片段的微小序列差异,从而应用在突变扫描、序列配对和基因分型等多个方面。它常常以曲线分析图的形式展示出来

凭借其速度和简便性,高分辨率熔解这种方法正在迅速普及。

其实双链DNA的熔解分析可追溯到上世纪六十年代,当时是通过紫外吸收来监测的。分析需要几微克的DNA,而样品以0.1-1.0°C/分钟的速率缓慢加热,常常要花上几个小时才能完成。后来,LightCycler定量PCR仪的出现,让荧光熔解分析变得流行。样品量因毛细管而缩减至纳克级,且熔解速率更快,达0.1-1.0°C/秒,这样熔解时间缩短至几分钟。当时使用的染料是SYBR® Green I。

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